氢氧化钾拉丝试验和新生霉素敏感试验

1.氢氧化钾拉丝试验

(1)原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现黏性，可用接种环搅拌后拉出黏液丝，而革兰阳性菌在稀碱溶液中没有上述变化。

(2)方法：取1滴40 g/L氢氧化钾水溶液于洁净玻片上，取新鲜菌落少量混合均匀，并不断提拉接种环，观察是否出现拉丝。

(3)结果判断：出现拉丝者为阳性，否则为阴性。

2.黏丝试验

(1)霍乱弧菌与0.5%去氧胆酸盐溶液混匀，1 min内菌体溶解，悬液由混浊变为清晰，并变黏稠，用接种环挑取时有黏丝形成。

(2)方法：在洁净载玻片上加0.5%去氧胆酸盐溶液，与可疑细菌混匀，用接种环挑取，观察结果。

(3)结果判断：在1 min内菌悬液由混变清并且黏稠，有黏丝形成为阳性，否则为阴性。

3. CAMP试验

(1)原理：B群链球菌具有“CAMP”因子，能促进葡萄球菌β溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。

(2)方法：先用产溶血素的金黄色葡萄球菌在血平板上划一横线，再取待检的链球菌与前一划线做垂直接种，两者相距0.5～1.0 cm，干35℃孵育18～24 h，观察结果。

(3)结果判断：在两种细菌划线交界处，出现箭头形透明溶血区为阳性。

(4)注意事项：被检菌与金黄色;葡萄球菌划线之间留出0.5～1.0 cm的距离，不得相接。

4。奥普托欣(Optochin )敏感试验

(1)原理：Optochin(乙基氢化去甲奎宁cthylhydrocupreine的商品名)可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌对其耐药。

(2)方法：将待检的a溶血的链球菌均匀涂布在血平板上，贴放Optochin纸片，35℃孵育18～24 h，观察抑菌环的大小。

(3)结果判断：抑菌环大于15 mm的为肺炎链球菌。

(4)注意事项：①做Optochin敏感实验的平板不能在二氧化碳环境下培养，因其可使抑菌环缩小;②同一血平板可同时测定几株菌株，但不要超过4株;③ Optochin纸片可保存于冰箱中，一般可维持9个月。如用已知敏感的肺炎链球菌检测为耐药时，纸片应废弃。

5.新生霉素敏感试验

(1)原理：金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低浓度新生霉素抑制，表现为敏感，而腐生葡萄球菌表现为耐药。

(2)方法：将待检菌接种于MH琼脂平板或血平板上，贴上每片含5 ug新生霉素诊断纸片一张，35℃孵育18～24 h，观察抑菌环的大小。

(3)结果判断：抑菌环直径大于15 min为敏感，不大于15 mm为耐药。

6.杆菌肽敏感试验

(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌对杆菌肽一般为耐药。故用以鉴别A群链球菌和非A群链球菌。

(2)方法：用棉拭子将待检菌均匀接种于血平板上，贴上每片含0.04 U的杆菌肽纸片一张，放35℃孵育18～24 h，观察结果。

(3)结果判断：抑菌环直径大于10 mm为敏感，不大于10 mm为耐药。

7. 0/229抑菌试验

(1)原理：0/129(2,4二氨基-6,7-二异丙基喋啶)能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，把每片含10 ug、每片含150 ug两种含量的0/129纸片贴于其上，放35℃孵育18～24 h，观察结果。

(3)结果判断：出现抑菌环者表示敏感，无抑菌环者为耐药。

(4)注意事项：弧菌属、邻单胞菌属敏感，气单胞菌属细菌为耐药。上述细菌传染性强危害大，实验过程中务必做好生物安全工作，或在相应生物安全级别实验室进行。